
乙醇酸氧化酶(glycollic oxidase, GO)试剂盒说明书
微量法 100T/96S
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.1)是植物光呼吸代谢中的关键酶,也是光下合成草酸的关键酶,它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,对研究光呼吸代谢过程及其调控具有重要意义。
测定原理
乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸和盐酸苯肼反应生成乙醛酸苯腙,在324nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)。
试剂组成和配制
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存。
展开剩余52%试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存,临用前加5mL双蒸水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:液体2mL×1支,4℃保存。
酶液提取
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g, 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定操作表
酶活性计算公式
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
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